第一代點(diǎn)擊化學(xué)在末端炔烴和疊氮化物之間的反應(yīng)中使用 Cu(I) 催化劑。 盡管偶聯(lián)反應(yīng)成功，但添加 Cu(I) 催化劑會(huì)對生物分子造成損害。

第二代點(diǎn)擊化學(xué)通過應(yīng)變促進(jìn)的疊氮化物-炔點(diǎn)擊化學(xué)利用環(huán)辛炔和疊氮化物之間的反應(yīng)。 該反應(yīng)不含銅，并且由于應(yīng)變分子的高活化能而進(jìn)行。 在這種無銅點(diǎn)擊化學(xué)中，常用的試劑包括 DBCO、OCT 和 BCN。 使用 BCN 等試劑可防止區(qū)域選擇性混合物的產(chǎn)生。

第三代點(diǎn)擊化學(xué)涉及四嗪和反式環(huán)辛烯 (TCO) 之間的連接，無需使用 Cu(I) 催化劑。 省略 Cu(I) 催化劑是體內(nèi)細(xì)胞標(biāo)記的理想選擇，同時(shí)仍能實(shí)現(xiàn)高速反應(yīng)。已發(fā)現(xiàn)這允許在較低濃度下進(jìn)行蛋白質(zhì)修飾。將 PEG 接頭引入 Click Chemistry 試劑可增強(qiáng)其水溶性，使其更便于在水性緩沖液中進(jìn)行生物標(biāo)記。

對于點(diǎn)擊反應(yīng)的產(chǎn)物純化，Clickchemistrytools提供多種介質(zhì)供大家選擇。

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